Le B.a.-ba de la d?termination

"Une loupe binoculaire et un microscope constituent tout le mat?riel indispensable pour la d?termination. Une loupe binoculaire basique (objectif 5x et oculaires 10x) pourra tr?s bien faire l'affaire, bien qu'un zoom soit tr?s pratique. Il faut savoir que le mat?riel haut de gamme peut atteindre des prix vertigineux rendant ces appareils inaccessibles ? l'amateur. L'?clairage devra ?tre suffisamment puissant pour permettre un travail aux forts grossissements. Les ?clairages froids (? ? antennes souples ? ou en anneau) sont ? cet ?gard tr?s efficaces mais relativement chers. Le microscope devra poss?der au moins des objectifs 6x, 20x, 40x, 60x et 100x et des oculaires 10x. L'?clairage devra l? aussi ?tre suf?fisant et avec un pouvoir transper?ant ?lev? pour permettre l'observation de tissus relati?vement opaques. Un microm?tre ?talonn? est absolument indispensable pour effectuer des mesures d'organes.

Un sp?cimen sec ? d?terminer sera pour partie r?humidifi?, afin de pouvoir observer le port ? l'?tat humide et le port ? l'?tat sec. Les observations sous loupe binoculaire et microscope se feront sur mat?riel hydrat?.

Les observations les plus classiques sont les observations de feuilles, de tiges et de capsules. Les feuilles seront simplement arrach?es d?licatement et plac?es entre lame et lamelle dans une goutte d'eau. La r?alisation de coupes transversales est indispensable pour observer l'anatomie d'une nervure ou d'une tige. Il convient d'utiliser pour ce faire, une lame de rasoir n'ayant jamais servi auparavant, de placer ?ventuellement l'?chantillon ? couper dans de la moelle de sureau et de r?aliser des tranches fines bien perpendiculaires ? l'axe de l'organe. Le p?ristome sera d?tach? de la capsule ? l'aide d'une lame de rasoir et coup? longitudinalement afin de le d?rouler et de s?parer l'?ventuel endostome hyalin. Toutes ces op?rations seront r?alis?es sous la loupe binoculaire, en manipulant les objets avec des pinces tr?s fines (n? 4 ou 5) et une aiguille mont?e.

L'usage de colorants (bleu de m?thyl?ne, etc.) peut se r?v?ler utile dans certains cas pr?cis. L'observation des structures hyalines est facilit? par une coloration assez forte. C'est le cas des feuilles de sphaignes qui pr?sentent des pores parfois difficiles ? mettre en ?vidence sans coloration.
Au contraire, des objets trop opaques ou trop sombres pourront ?tre d?color?s avec de l'eau de javel. Cette technique peut ?tre utile pour l'observation de spores de Marchantiales ou de coupes ?paisses.

L'utilisation de d?tergent (liquide ? vaisselle) est tr?s utile pour hydrater les sp?cimens r?fractaires mais devra ?tre utilis?e avec pr?caution car le d?tergent a le grave inconv?nient de faire dispara?tre instantan?ment les ol?ocorps des h?patiques." (V. Hugonnot, 2006. Bulletin mycologique et botanique Dauphin?-Savoie, 182 : 77-80)

"Les ?chantillons s?ch?s pourront ?tre r?humect?s et servir pour des ?tudes comparatives plusieurs ann?es durant. Certaines esp?ces x?rophiles se r?hu-mectent presque instantan?ment ; faut compter, en g?n?ral cinq ? dix minutes pour la plupart des Muscin?es ; pour acc?lerer la r?hydratation, on peut tremper les ?chantillons dans de l'alcool ? 90? puis dans une solution de potassium (KOH) (F. Bick, com. pers.) ; ce traitement r?tablit tr?s rapidement la turgescence des feuilles. La r?-hydratation d'une h?patique peut demander une mac?ration durant quelques heures dans de l'acide lactique concentr? (J. Augier, 1966) suivie d'un lavage. [...]

Autre investissement indispensable : l'achat d'au moins une paire de brucelles tr?s fines (du mat?riel d'horlogerie, par exemple), de pr?f?rence inoxydables. Une lancette fine peut ?tre utilis?e pour pr?lever les feuilles. Si l'on proc?de avec des brucelles, le pr?l?vement des feuilles doit se faire tr?s soigneusement, en saisissant les feuilles vers leur base et en les tirant parall?lement ? la tige de haut en bas, de mani?re ? retirer les ?ventuelles oreillettes sans les d?chirer. Les coupes, faute d'un microtome, seront r?alis?es avec une lame de rasoir neuve sur un ?chantillon gliss? dans une tranche de moelle de sureau ou de polystyr?ne expans?.
L'observation microscopique des feuilles ou des coupes se fait habituellement ? partir d'un montage dans l'eau entre lame et lamelle. L'usage de colorants est rarement n?cessaire ; lors de l'identification de diverses sphaignes, le violet de m?thyle, le violet gentiane ou la fuchsine peuvent ?tre utilis?s pour mieux r?v?ler les pores qui ponctuent les hyalocystes, la forme et la disposition de ces pores ?tant caract?ristiques de certaines esp?ces. Un test de coloration au Lugol appliqu? sur les feuilles peut aider ? discriminer certaines esp?ces du genre Porella.

Plusieurs techniques permettent de conserver les montages entre lame et lamelle ; pour les conservations de longue dur?e, le montage au Baume du Canada est recommand?. Pour une conservation ? moyen terme, on peut se contenter de remplacer l'eau du montage par de la glyc?rine puis de luter la lamelle au vernis ? ongle (F. Bick, com. pers.)." (Bailly G., Vadam J.C. & Vergon J.P., 2004. Guide pratique d'identification des bryophytes aquatiques. DIREN Franche-Comt?. 158 p.)

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